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主營(yíng)產(chǎn)品:主要技術(shù)服務(wù):細(xì)胞STR鑒定;支原體檢測(cè);細(xì)胞種屬檢測(cè);端粒長(zhǎng)度檢測(cè);端粒酶活性檢測(cè)等。

產(chǎn)品展示PRODUCTS

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PDX模型質(zhì)控檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)(定量PCR法)

PDX模型質(zhì)控檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)(定量PCR法)

更新時(shí)間:2023-06-08

訪問(wèn)量:1779

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

生產(chǎn)地址:

簡(jiǎn)要描述:
人源腫瘤異種移植模型(Patient-Derived tumor Xenograft , PDX)是將病人的腫瘤組織直接移植到免疫缺陷鼠而建立的人源異種移植模型,是癌癥機(jī)制研究和藥物測(cè)試的有用工具,但隨著傳代次數(shù)增加,腫瘤組織保真度下降。
本產(chǎn)品試劑盒采用雙色熒光探針 qPCR(FAM+HEX)檢測(cè)PDX模型總DNA中小鼠DNA的比例,并以此推導(dǎo)小鼠細(xì)胞浸潤(rùn)比例,檢測(cè)對(duì)象為組織DNA。該試劑盒具有
品牌其他品牌產(chǎn)地類別國(guó)產(chǎn)
應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥

【產(chǎn)品規(guī)格】

PDX50  50T

【產(chǎn)品說(shuō)明】

人源腫瘤異種移植模型(Patient-Derived tumor Xenograft , PDX)是將病人的腫瘤組織直接移植到免疫缺陷鼠而建立的人源異種移植模型,是癌癥機(jī)制研究和藥物測(cè)試的有用工具,但隨著傳代次數(shù)增加,腫瘤組織保真度下降。

本產(chǎn)品試劑盒采用雙色熒光探針 qPCRFAM+HEX檢測(cè)PDX模型總DNA中小鼠DNA的比例,并以此推導(dǎo)小鼠細(xì)胞浸潤(rùn)比例,檢測(cè)對(duì)象為組織DNA。該試劑盒具有以下特點(diǎn)

穩(wěn)定:全程閉管操作,無(wú)交叉污染。                      

1. 可靠樣本與多個(gè)內(nèi)標(biāo)同板檢測(cè),減少孔間干擾。

2. 方便:操作簡(jiǎn)單,無(wú)需電泳步驟。

3. 定量 CT 值,可定量檢測(cè)。

 

【運(yùn)輸及保存條件】

低溫冷凍運(yùn)輸, -20保存,有效期 1 年,凍融以后,4保存,有效期4周。

【產(chǎn)品組分】

組分名稱

PDX50

Biowing®PDX qPCR SuperMix

2,700µL

Standard1

30µL

Standard2

30µL

Standard3

30µL

RNase Free Water

100µL

注:1Biowing®PDX qPCR SuperMix含引物與其他PCR成分;2Standard包含小鼠DNA和人基因組DNAStandard123分別對(duì)應(yīng)小鼠DNA含量為25%50%75%(3)本試劑盒提供試劑,使用前請(qǐng)上下輕柔顛倒十次混勻,避免起低速離心、小心開(kāi)啟后使用

【閾值設(shè)置】50%標(biāo)準(zhǔn)品Standard2擴(kuò)增曲線,設(shè)置閾值線,滿足下列CT值范圍

(1)DNA擴(kuò)增曲線CT定為25±1

2)小鼠DNA擴(kuò)增曲線CT值定為24±1

【操作步驟】

1. 準(zhǔn)備

使用商業(yè)化DNA抽提試劑盒提取組織DNADNA純度A260/A280≈1.8建議濃度為20-50ng/µL上樣2µL

樣品濃度過(guò)高或過(guò)低會(huì)影響擴(kuò)增效率,對(duì)實(shí)驗(yàn)造成干擾,測(cè)量結(jié)果誤差較大。

2. qPCR反應(yīng)體系及條件

反應(yīng)體系以20µL為例

組分/樣品管

待測(cè)樣品管(µL)

陰性對(duì)照管(µL)

標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照1(µL)

標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照2(µL)

標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照3(µL)

Biowing®PDX qPCR SuperMix

18

18

18

18

18

RNase Free Water

0

2

0

0

0

Standard1

0

0

2

0

0

Standard2

0

0

0

2

0

Standard3

0

0

0

0

2

Sample

2

0

0

0

0

PCR儀設(shè)置以SLAN-96S為例

步驟

循環(huán)數(shù)

溫度

時(shí)間

1

預(yù)變性

1

94

5 min

 

2

變性

 

40

95

15 s

退火

60

1 min

延伸

72

30 s

溫度選擇:72延伸時(shí)收集熒光信號(hào)

通道選擇:人細(xì)胞檢測(cè)通道-FAM鼠細(xì)胞檢測(cè)通道-HEX

標(biāo)準(zhǔn)曲線舉例

圖片2.png

 

注:建議每批次檢測(cè),均繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,三個(gè)陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品,分別3次技術(shù)重復(fù),繪制散點(diǎn)圖并添加線性擬合趨勢(shì)線,獲得回歸方程,用于小鼠細(xì)胞浸潤(rùn)比例的計(jì)算。

結(jié)果判讀 標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程為:Y=-0.4061*X+0.4089為例

PDX模型中細(xì)胞比例計(jì)算方法(鼠:人):根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算PDX樣本中的鼠人細(xì)胞比例

注:標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程為:Y=-0.4061*X+0.4089

相關(guān)系數(shù)R20.9998

X:△Ct值(CT小鼠-CT

YPDX模型中人鼠混樣比例(樣本比例為小鼠細(xì)胞:人細(xì)胞)的log10值,即Y=log10(小鼠:人比例)

小鼠:人比例=power(10,Y)

小鼠DNA占總 DNA 百分比=power(10,Y)/(1+ power(10,Y))

DNA占總DNA百分比=1-小鼠DNA占總DNA百分比


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