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端粒長(zhǎng)度檢測(cè)試劑盒
更新時(shí)間:2024-03-27
訪問(wèn)量:2075
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
生產(chǎn)地址:上海
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
【產(chǎn)品規(guī)格】
1. TL25 25 次/盒
2. TL50 50 次/盒
【產(chǎn)品說(shuō)明】
端粒長(zhǎng)度檢測(cè)試劑盒(Telomeres):是真核生物線性染色體末端的非編碼串聯(lián)重復(fù)性(TTAGGG)n陣列,端粒長(zhǎng)度的變化,與衰老、癌癥、或神經(jīng)退行性等多種疾病相關(guān)。定量PCR法是檢測(cè)端粒長(zhǎng)度的經(jīng)典技術(shù),用時(shí)短,操作簡(jiǎn)單,結(jié)果準(zhǔn)確,適用于批量樣本檢測(cè)。
本產(chǎn)品試劑盒采用雙色熒光 qPCR(SYRBgreen+VIC)檢測(cè)端粒相對(duì)長(zhǎng)度,檢測(cè)對(duì)象為血液、口腔拭子或細(xì)胞DNA。該試劑盒具有以下特點(diǎn)。
1. 穩(wěn)定:全程閉管操作,無(wú)交叉污染。
2. 可靠:端粒與內(nèi)參單管檢測(cè),減少孔間干擾。
內(nèi)參基因?yàn)槎嗫截悾c端粒量差降低。
3. 方便:操作簡(jiǎn)單,無(wú)需電泳步驟。
4. 定量: △CT 值,可定量檢測(cè)端粒相對(duì)長(zhǎng)度。
【運(yùn)輸及保存條件】
低溫冷凍運(yùn)輸, -20℃保存,有效期 1 年,凍融以后,4℃保存,有效期4周。
【產(chǎn)品組分】
注:本試劑盒提供試劑,使用前請(qǐng)上下輕柔顛倒十次混勻,后低速離心、小心開(kāi)啟。避免起泡。
【操作步驟】
1. 樣品質(zhì)控
使用商業(yè)化DNA抽提試劑盒提取血液、細(xì)胞或組織DNA,DNA純度A260/A280≈1.8,檢測(cè)樣品濃度標(biāo)化為15~20ng/µL,上樣4µL。
注:標(biāo)準(zhǔn)品濃度已標(biāo)化為15~20ng/µL,上樣4µL。樣品及標(biāo)準(zhǔn)品濃度過(guò)高或過(guò)低會(huì)影響擴(kuò)增效率,對(duì)實(shí)驗(yàn)造成干擾,測(cè)量結(jié)果誤差較大。
2. qPCR反應(yīng)體系及條件
反應(yīng)體系以20µL為例
PCR儀設(shè)置以 ABI 7500為例,其他型號(hào)定量PCR儀應(yīng)通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行參數(shù)校正或咨詢專業(yè)技術(shù)人員。
【基線設(shè)置】
內(nèi)參基線設(shè)定:以標(biāo)準(zhǔn)品基線設(shè)定內(nèi)參基線,將內(nèi)參的基線設(shè)定為6~15個(gè)循環(huán)。
端粒基線設(shè)定:以標(biāo)準(zhǔn)品基線設(shè)定端粒基線,將端粒的基線設(shè)定為3~15個(gè)循環(huán)。
【閾值設(shè)置】
內(nèi)參閾值設(shè)定:以標(biāo)準(zhǔn)品CT值設(shè)定內(nèi)參擴(kuò)增曲線閾值,將內(nèi)參的 CT 值定為 21±1。
端粒閾值設(shè)定:以標(biāo)準(zhǔn)品CT值設(shè)定端粒擴(kuò)增曲線閾值,將端粒的 CT 值定為13±1 。
端粒長(zhǎng)度檢測(cè)試劑盒說(shuō)明:
(1)如果標(biāo)準(zhǔn)品的內(nèi)參CT 值>25,但陰性對(duì)照管的內(nèi)參CT 值正常, 表明試劑盒擴(kuò)增效率下降或儀器運(yùn)行障礙。
(2)如果陰性對(duì)照管的內(nèi)參或端粒CT<25,表明在環(huán)境或加樣過(guò)程中存在輕微污染。
備注:
1. 樣本檢測(cè)以及標(biāo)準(zhǔn)品的使用應(yīng)做技術(shù)上三重復(fù),陰性對(duì)照做單重復(fù)。
2. 如果檢測(cè)樣本為血液DNA,可以將所得端粒相對(duì)長(zhǎng)度在上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司構(gòu)建的1500例中國(guó)人群數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì),評(píng)估樣本個(gè)體端粒的相對(duì)長(zhǎng)度;若選用其他樣本,建議自行構(gòu)建數(shù)據(jù)庫(kù)并做進(jìn)一步分析。
3. 端粒長(zhǎng)度計(jì)算方法(T/S):先分別計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品與樣品的△CT=CT(端粒)-CT(內(nèi)參)
再計(jì)算 T/S=log2 (△CT(樣品)-△CT(標(biāo)準(zhǔn)品))
注:T為待測(cè)樣品,S為標(biāo)準(zhǔn)品,T/S為待測(cè)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的端粒相對(duì)長(zhǎng)度比。
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